一、實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）概述 實驗性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）是一種以特異性致敏的CD4+T細胞介導(dǎo)為主的自身免疫性疾病，其病理變化與多發(fā)性硬化（MS）類似。EAE模型是研究MS病理過程和發(fā)病機制的重要工具，在臨床神經(jīng)免疫學(xué)研究中具有重要意義。  
二、動物選擇 多種動物可用于EAE模型的建立，包括雞、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、羊、犬和猴等。不同種屬或品系的動物對EAE的敏感性存在顯著差異。常用的敏感動物包括Lewis和DA大鼠、PL/J和SJL/J小鼠以及Hartley和StrAIn13豚鼠等。小鼠和大鼠的EAE模型在臨床表現(xiàn)、病理和免疫等方面與人類脫髓鞘疾病較為相似，因此應(yīng)用最為廣泛。
三、建模方法
（一）主動誘導(dǎo)法 主動誘導(dǎo)法是通過將抗原與佐劑混合后注射到動物體內(nèi)，經(jīng)過一定時間的潛伏期誘導(dǎo)EAE的產(chǎn)生。常用的致敏抗原有髓鞘堿性蛋白（MBP）、蛋白脂（PLP）、髓寡樹突細胞糖蛋白（MOG）等。
1、抗原與佐劑的混合：抗原需與佐劑（如完全弗氏佐劑，CFA）混合制成乳劑。CFA能提高抗原的免疫反應(yīng)強度并延長免疫時間，而百日咳毒素（PTX）可增加血管通透性，促進T細胞通過血腦屏障。
2、注射途徑：常用的注射途徑包括皮下、腹腔和尾靜脈等，其中皮下多點注射和腳墊注射的發(fā)病率較高。
（二）被動轉(zhuǎn)移實驗 被動轉(zhuǎn)移實驗通過將EAE抗原特異反應(yīng)性T細胞轉(zhuǎn)輸給同一品系的健康動物，使其發(fā)病。這是研究EAE發(fā)病機制的直接證據(jù)，也是研究治療和預(yù)防措施的良好模型。  

四、模型判定標(biāo)準(zhǔn)
（一）神經(jīng)功能評分 根據(jù)Kono等提出的標(biāo)準(zhǔn)，神經(jīng)功能評分分為5級：1級為尾部無力，2級為尾部無力加肢體無力，3級為肢體輕度麻痹，4級為肢體嚴(yán)重麻痹，5級為瀕死狀態(tài)。 （二）病理檢測結(jié)果 通過HE染色等方法檢查中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和脫髓鞘情況。EAE模型組小鼠脊髓中可見大量炎性細胞聚集，髓鞘結(jié)構(gòu)松散、崩解，密度降低。 （三）免疫熒光雙染結(jié)果 EAE模型組小鼠脊髓中活化的小膠質(zhì)細胞數(shù)量增多，而活化星形膠質(zhì)細胞數(shù)量減少。 （四）細胞流式分析 EAE模型小鼠中致炎細胞Th17數(shù)量顯著增加，抑炎細胞Treg和Breg數(shù)量顯著降低。
五、以小鼠為例的MOG誘導(dǎo)EAE模型建立
前期準(zhǔn)備
1、完全弗氏佐劑（CFA）的配制 ：將結(jié)核分枝桿菌加入弗氏不完全佐劑（IFA）中，充分混勻后置于4℃冰箱備用。
2、百日咳毒素儲存液（PTX）的配制 ：將百日咳毒素溶解于PBS中，儲存于4℃冰箱。
3、抗原佐劑乳化物的制備 ：將MOG 35-55多肽與CFA混合乳化，形成油包水混合物。

模型制備
1、動物選擇 ：選擇6-8周齡、18-25克的雌性C57BL/6小鼠，確保品系純正和SPF級飼養(yǎng)環(huán)境。
2、注射與處理 ：

• 麻醉小鼠，對注射部位進行消毒。
• 每側(cè)皮下注射抗原佐劑乳化物100μl，隨后腹腔注射PTX。
• 48小時后再次腹腔注射PTX，第七天加強免疫。

3、觀察與記錄 ：觀察小鼠體重和臨床神經(jīng)功能分級，直至MOG免疫后30天。

六、結(jié)語 EAE模型是研究MS病理機制和治療方法的重要工具。通過優(yōu)化建模方法和評估標(biāo)準(zhǔn)，EAE模型為揭示MS的發(fā)病機制和開發(fā)新的治療策略提供了有力支持。

杭州斯達特  (www.starter-bio.com) 志在為全球生命科學(xué)行業(yè)提供優(yōu)質(zhì)的抗體、蛋白、試劑盒等產(chǎn)品及研發(fā)服務(wù)。依托多個開發(fā)平臺：重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗、重組蛋白開發(fā)平臺（E.coli,CHO,HEK293,InsectCells）,已正式通過歐盟98/79/EC認(rèn)證、ISO9001認(rèn)證、ISO13485。