抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）單克隆抗體的制備_abio生物試劑品牌網(wǎng)
抗豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）單克隆抗體相關(guān)參數(shù)解析
一、TGEV 毒株型號區(qū)別 豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）屬于冠狀病毒科，其毒株分型主要基于基因序列差異和抗原性差異，常見毒株類型及特點(diǎn)如下：
二、單克隆抗體制備流程
抗 TGEV 單克隆抗體制備通常采用雜交瘤技術(shù)，核心步驟及關(guān)鍵參數(shù)如下：
1. 抗原制備
1. 抗原識別特異性
五、制備與應(yīng)用注意事項(xiàng)
一、TGEV 毒株型號區(qū)別 豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）屬于冠狀病毒科，其毒株分型主要基于基因序列差異和抗原性差異，常見毒株類型及特點(diǎn)如下：
| 毒株類型 | 代表株 | 基因特征 | 抗原性特點(diǎn) | 流行區(qū)域 / 時(shí)間 |
|---|---|---|---|---|
| 經(jīng)典毒株 | Purdue-115 | ORF3 基因完整，S 蛋白受體結(jié)合域（RBD）保守性高 | 與早期疫苗株抗原匹配度高 | 早期北美、歐洲流行株 |
| 變異毒株 | TH-98 | ORF3 基因缺失（ΔORF3），S 蛋白出現(xiàn)氨基酸突變（如 S1 亞基 D407N 突變） | 抗原性與經(jīng)典毒株存在差異，可逃逸部分抗體 | 20 世紀(jì) 90 年代后亞洲流行株 |
| 重組毒株 | China-2012 | S 蛋白與豬德爾塔冠狀病毒（PDCoV）存在基因重組，抗原表位多樣性增加 | 交叉反應(yīng)性降低，需新型抗體識別 | 近年中國部分地區(qū)流行株 |
| 疫苗衍生毒株 | MLV（弱毒疫苗株） | 經(jīng)過細(xì)胞傳代致弱，S 蛋白部分抗原表位弱化，免疫原性保留但致病性降低 | 主要用于疫苗制備，與野毒株抗原性部分重疊 | 全球疫苗生產(chǎn)用毒株 |
- 抗原類型：
- 全病毒抗原（滅活或純化 TGEV，如 Purdue-115 株）：誘導(dǎo)廣譜抗體，但需生物安全防護(hù)（BSL-2 實(shí)驗(yàn)室）。
- 重組蛋白抗原（如 S 蛋白 RBD 區(qū)、N 蛋白）：安全性高，抗原表位明確，常用于特異性抗體篩選。
- 免疫方案：
- 動物模型：BALB/c 小鼠（6-8 周齡），腹腔注射抗原（10-50 μg / 次），佐劑（弗氏完全 / 不完全佐劑）輔助。
- 免疫周期：3-4 次基礎(chǔ)免疫（間隔 2 周）+ 1 次加強(qiáng)免疫（融合前 3 天靜脈注射）。
- 融合步驟：
- 抗體篩選：
- 間接 ELISA：以 TGEV 抗原包被，篩選陽性雜交瘤細(xì)胞株。
- 中和試驗(yàn)（Neutralization Assay）：檢測抗體對 TGEV 感染的中和能力（如 TCID??抑制率）。
- 毒株交叉反應(yīng)性測試：用不同型毒株（如經(jīng)典株、變異株）驗(yàn)證抗體特異性。
- 有限稀釋法：將雜交瘤細(xì)胞稀釋至 0.5 細(xì)胞 / 孔，單克隆培養(yǎng)，確保單一抗體來源。
- 抗體生產(chǎn)：
- 小鼠腹腔誘生法：注射雜交瘤細(xì)胞，收集腹水，抗體濃度可達(dá) 1-10 mg/mL。
- 懸浮培養(yǎng)法：無血清培養(yǎng)基大規(guī)模培養(yǎng)，適合工業(yè)化生產(chǎn)，抗體純度高（需親和層析純化）。
1. 抗原識別特異性
- 表位類型：
- 中和表位：主要位于 S 蛋白 RBD 區(qū)（如氨基酸殘基 380-440），抗體可阻斷病毒與宿主細(xì)胞受體（氨肽酶 N）結(jié)合。
- 非中和表位：常見于 N 蛋白、M 蛋白，用于病毒檢測（如 ELISA、免疫熒光），但無中和活性。
- 毒株交叉反應(yīng)性：
- 經(jīng)典株抗體（如針對 Purdue-115 S 蛋白）對變異株（如 TH-98）中和效率可能下降 50% 以上。
- 新型變異株抗體（如針對 China-2012 S 蛋白）需通過中和試驗(yàn)驗(yàn)證對不同毒株的交叉保護(hù)力。
- 中和效價(jià)（IC??）：
- 指抑制 50% 病毒感染所需的抗體濃度，經(jīng)典株抗體 IC??通常為 0.1-1 μg/mL，變異株抗體可能需更高濃度（如 1-10 μg/mL）。
- 抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）：
- 部分抗體可通過 Fc 段激活 NK 細(xì)胞，增強(qiáng)對病毒感染細(xì)胞的殺傷，需通過流式細(xì)胞術(shù)檢測。
- 診斷用抗體：需高親和力（KD 值＜10?? M），識別保守表位（如 N 蛋白），避免毒株變異導(dǎo)致假陰性。
- 治療用抗體：需同時(shí)具備高中和活性和廣譜毒株覆蓋能力，優(yōu)先選擇針對 S 蛋白保守區(qū)的抗體。
| 抗體類型 | 針對毒株 | 中和活性 | 交叉反應(yīng)性 | 主要應(yīng)用 |
|---|---|---|---|---|
| 經(jīng)典株特異性抗體 | Purdue-115 | 高（對經(jīng)典株） | 對變異株低 | 早期疫苗效果評估、經(jīng)典株檢測 |
| 變異株廣譜抗體 | TH-98、China-2012 | 高（對變異株） | 部分覆蓋經(jīng)典株 | 流行毒株診斷、新型疫苗研發(fā) |
| N 蛋白通用抗體 | 所有毒株 | 無中和活性 | 高（保守抗原） | 病毒總載量檢測（如 ELISA） |
- 生物安全：TGEV 活病毒操作需在 BSL-2 實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，滅活抗原需驗(yàn)證病毒失活（如 TCID??檢測）。
- 毒株代表性：制備廣譜抗體時(shí)，需用多種流行毒株（如經(jīng)典株 + 變異株）免疫動物，或通過噬菌體展示技術(shù)篩選跨毒株表位。
- 抗體穩(wěn)定性：純化后的單克隆抗體需檢測熱穩(wěn)定性（如 4℃、-20℃保存效期）和凍融穩(wěn)定性（3 次循環(huán)后活性≥80%）。
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