牛傳染性胸膜肺疫（Bovine Contagious Pleuropneumonia，BCPP）是由絲狀支原體絲狀亞種（Mycoplasma mycoides subsp. mycoides，Mmm） 引起的一種高度接觸性傳染病，主要侵害牛的呼吸系統(tǒng)，以纖維素性胸膜肺炎為典型特征。該病的防控依賴于早期診斷和有效疫苗，而Mmm 的特異性蛋白是實現(xiàn)這些目標的核心靶標。以下從關鍵蛋白的生物學特性、應用價值及研究進展展開詳細解析：

一、牛傳染性胸膜肺疫的關鍵蛋白及其特性

Mmm 作為無細胞壁的革蘭氏陰性菌，其膜蛋白和分泌蛋白是宿主免疫識別的主要對象，也是診斷和疫苗研發(fā)的重點。目前研究最深入、應用最廣泛的蛋白包括以下幾類：

1.  脂蛋白（如 LppA、LppB）

• 結構與表達：脂蛋白是 Mmm 膜表面的主要成分，含 N 端脂化位點，通過脂錨定與細胞膜結合。其中LppA（脂蛋白 A） 是研究最多的成員，分子量約 40 kDa，在 Mmm 的所有菌株中高度保守（序列同源性 > 95%），且僅在絲狀支原體復合體中表達，具有極強的種特異性。
• 免疫原性：LppA 可被感染牛的免疫系統(tǒng)快速識別，感染后 1 周即可誘導特異性抗體產生，且抗體持續(xù)時間長達數(shù)月，是早期診斷的理想靶標。同時，它能激活 Th1 型細胞免疫（如誘導 IFN-γ 分泌），參與宿主對病原體的清除。
• 功能：LppA 可能參與 Mmm 對宿主呼吸道上皮細胞的黏附過程，是其定植和致病的關鍵毒力因子之一。

2.  膜蛋白（如 P80、VspA）

• P80 蛋白：分子量約 80 kDa 的膜表面蛋白，具有高度免疫原性，幾乎所有感染牛都會產生針對 P80 的抗體。其序列在不同 Mmm 菌株中保守性較強，且與其他支原體的交叉反應極低，適合作為診斷抗原。研究發(fā)現(xiàn)，P80 可能與 Mmm 逃避宿主免疫攻擊有關。
• VspA（可變表面蛋白 A）：屬于 Mmm 的可變表面蛋白家族，其序列可隨菌株進化發(fā)生變異，導致免疫逃逸。但 VspA 在感染早期的表達量極高，且可誘導強烈的局部黏膜免疫應答，因此仍是疫苗研發(fā)中需重點關注的候選分子（需結合保守區(qū)域設計）。

3.  分泌蛋白（如 HSP70、NADH 氧化酶）

• HSP70（熱休克蛋白 70）：作為應激蛋白，在 Mmm 感染宿主后因環(huán)境壓力（如宿主體溫、免疫攻擊）大量分泌，具有較強的免疫原性。HSP70 不僅能誘導全身性抗體應答，還可通過激活樹突狀細胞增強細胞免疫，是潛在的亞單位疫苗成分。
• NADH 氧化酶：參與 Mmm 的能量代謝，同時可通過抑制宿主的氧化應激反應（如清除活性氧）促進其在宿主體內存活。該蛋白在感染全程持續(xù)表達，對應的抗體在慢性感染階段仍可檢出，適合作為長期感染的監(jiān)測指標。

二、關鍵蛋白的應用場景
1.  診斷技術開發(fā)

基于 Mmm 特異性蛋白的診斷方法已逐步替代傳統(tǒng)的病原分離（耗時且敏感性低）和補體結合試驗（特異性差），成為主流技術：

• ELISA 檢測：以重組 LppA 或 P80 為包被抗原，檢測牛血清中的特異性 IgG 抗體。該方法對急性感染的檢出率 > 90%，對慢性感染的檢出率 > 85%，且與其他支原體（如牛支原體）的交叉反應 < 5%，適合大規(guī)模群體篩查。
• 膠體金試紙條：將 LppA 與 P80 組合作為檢測抗原，可實現(xiàn)現(xiàn)場快速檢測（10-15 分鐘出結果），靈敏度與 ELISA 相當，操作簡便，適合基層獸醫(yī)或養(yǎng)殖場使用。
• PCR 結合蛋白檢測：通過檢測lppA或p80基因的存在，結合蛋白水平的表達驗證，可提高早期感染（抗體未產生階段）的診斷準確性，尤其適用于疫情暴發(fā)時的快速溯源。

2.  疫苗研發(fā)

目前牛傳染性胸膜肺疫的傳統(tǒng)疫苗（如減毒活疫苗 T1/44 株）存在安全性爭議（可能返強）和免疫期短（約 1 年）的問題，基于關鍵蛋白的亞單位疫苗是研究熱點：

 

• 單一蛋白疫苗：LppA 因其高保守性和強免疫原性，單獨免疫可誘導 70%-80% 的保護率，且無返毒風險，已在部分國家進行田間試驗。
• 多蛋白聯(lián)合疫苗：將 LppA（誘導體液免疫）與 HSP70（增強細胞免疫）、VspA 保守區(qū)域（激活黏膜免疫）聯(lián)合，可激活全方位免疫應答，保護率提升至 85% 以上，免疫期延長至 18-24 個月，是當前研發(fā)的重點方向。
• 載體疫苗：以腺病毒或乳酸菌為載體，攜帶lppA和p80基因，通過鼻腔或口服免疫，可誘導局部黏膜免疫和全身性免疫，減少注射應激，適合大規(guī)模免疫接種。

三、蛋白表達系統(tǒng)與技術挑戰(zhàn)

Mmm 的蛋白多為膜蛋白或脂蛋白（需脂化修飾），其重組表達需兼顧結構完整性和抗原活性，不同系統(tǒng)各有特點：

 

表達系統(tǒng) 優(yōu)勢與不足 適用場景 原核表達系統(tǒng)（大腸桿菌） 優(yōu)勢：表達量高（LppA 可達 50-200 mg/L），成本低，適合大規(guī)模生產；
不足：缺乏脂化修飾和復雜折疊能力，重組蛋白可能因結構差異導致抗原活性下降（如 LppA 的脂化缺失會使其免疫原性降低 30%-50%）。 低成本診斷試劑、初步抗體篩選 真核表達系統(tǒng)（酵母、昆蟲細胞） 優(yōu)勢：酵母（如畢赤酵母）可實現(xiàn)部分脂化修飾，昆蟲細胞可模擬膜蛋白的天然折疊，抗原活性更接近天然蛋白；
不足：表達量較低（酵母 LppA 約 10-30 mg/L），成本較高，脂化效率不穩(wěn)定。 高靈敏度診斷試劑、疫苗研發(fā) 支原體表達系統(tǒng)（如無致病性支原體） 優(yōu)勢：可完全模擬 Mmm 蛋白的脂化修飾和膜定位，抗原活性與天然蛋白一致；
不足：培養(yǎng)周期長（5-7 天），表達量低（<5 mg/L），僅用于基礎研究。 免疫機制研究、天然抗原制備 四、研究進展與未來方向

1. 新型診斷標志物的發(fā)現(xiàn)：通過蛋白質組學技術篩選 Mmm 在感染不同階段（急性、慢性、恢復期）的差異表達蛋白，已發(fā)現(xiàn)NADH 氧化酶和ATP 結合蛋白在慢性感染中特異性高表達，可作為區(qū)分感染階段的新靶標。
2. 疫苗免疫增強策略：將 MPB83（牛結核抗原，已證實可增強 Th1 免疫）與 LppA 聯(lián)合使用，發(fā)現(xiàn)可顯著提高 IFN-γ 分泌水平，保護率提升至 90%，為多病原聯(lián)合防控提供思路。
3. 基因編輯減毒疫苗：利用 CRISPR 技術敲除 Mmm 的毒力基因（如vspA），同時過表達 LppA，構建的減毒疫苗安全性更高，免疫期延長至 2 年以上，已進入臨床試驗階段。

牛傳染性胸膜肺疫的關鍵蛋白（如 LppA、P80、HSP70）因其高特異性和強免疫原性，在疾病診斷和疫苗研發(fā)中發(fā)揮核心作用。原核表達系統(tǒng)結合體外修飾可平衡成本與抗原活性，滿足大規(guī)模應用需求；而多蛋白聯(lián)合疫苗和基因編輯減毒疫苗是未來防控技術的重要突破方向。隨著研究的深入，這些蛋白將為牛傳染性胸膜肺疫的精準防控提供更高效的工具。