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FcR阻斷劑在優化流式細胞分析過程中的作用_abio生物試劑品牌網

abiopp5個月前 (04-28)技術15
Fc Receptor
流式細胞術通過熒光標記抗體特異性的識別細胞或細胞亞群,從而在流式細胞儀中進行檢測和區分。標記抗體的Fab段進行特異性識別,但所有抗體中高度保守區Fc段也會被部分細胞識別, 識別免疫球蛋白(Ig)Fc段的蛋白即為Fc受體(Fc Receptor)。

Fc受體存在于多種免疫細胞的表面,包括單核細胞、巨噬細胞和DC細胞、嗜酸性粒細胞,嗜堿性粒細胞、中性粒細胞、髓系細胞、B細胞表面、NK細胞等等,在免疫細胞表面發揮多種關鍵功能

吞噬作用:免疫細胞如巨噬細胞和中性粒細胞通過Fc受體識別并吞噬被抗體包被的微生物,這是一種重要的先天免疫防御機制。

溶酶體降解:吞噬后的免疫復合物被運輸到溶酶體內,溶酶體中的酶類能夠降解病原體和其他異物,完成病原體的清除過程。

細胞毒作用:自然殺傷細胞等通過Fc受體識別被抗體標記的細胞,釋放細胞毒性顆粒。

細胞因子和趨化因子的分泌:激活的免疫細胞能夠分泌細胞因子和趨化因子,有助于調節免疫反應,吸引其他免疫細胞到感染或炎癥部位。


圖1 免疫細胞表面FC受體的功能

FcR根據它們結合的免疫球蛋白類型被分為不同的類別:IgG的Fc受體(FcγR)、IgE的Fc受體(FcεR、IgA的Fc受體(FcαR)、IgM的Fc受體(FcμR)和IgD的Fc受體(FcδR)。

日常實驗中使用的多是IgG類型的單抗,其Fc受體(FcγR)根據親和力強弱可分為三個亞家族:FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)和FcγRIII(CD16)。


圖2 FcγR 家族和表達模式

FcR阻斷
在流式實驗中細胞表面表達的多種FcγR易與抗體FC段結合,出而出現非特異性染色,導致分析中容易出現高背景或甚至假陽性信號。為獲得正確的陽性細胞群,可以先加入封閉試劑孵育細胞,占據結合位點阻斷Fc受體與抗體結合,降低檢測背景獲得更準確的結果。

常見的封閉試劑主要有以下幾種:
血清或血清隨純化的IgG
抗CD16/32抗體
抗CD16/32抗體

S-RMab?FcR阻斷劑
斯達特上新Human FcR Blocking Reagent,親和力強,聯同已上新的Mouse Fc Receptor Blocker,提供全方位FcR阻斷產品。

產品名稱:Human FcR Blocking Reagent           貨號:S0F0002           阻斷用量:1.0μg per 2.5x10^5 cells in 100ul volume

流式分析人PBMC標記兔單克隆IgG同型對照抗體,孵育30分鐘后在冰上PBS(右側)與Human FcR Blocking Reagent按1/100(1 μg,2.5×10^5細胞在100 μL中)稀釋度處理以阻斷Fc受體及非特異性蛋白結合,并與未標記對照組(未與一抗和二抗孵育的細胞)(藍色)進行比較。

流式細胞術分析THP-1細胞標記兔單克隆IgG同型對照抗體,在冰上PBS(黑色)或人類FcR阻斷試劑按1/100稀釋度(1 μg,2.5×10^5細胞在100 μL中)(紅色)孵育30分鐘處理,以阻斷Fc受體及非特異性蛋白結合,并與未標記對照組(未與一抗和二抗孵育的細胞)(藍色)進行比較。

產品信息


杭州斯達特(www.starter-bio.com)志在為全球生命科學行業提供優質的抗體、蛋白、試劑盒等產品及研發服務。依托多個開發平臺:重組兔單抗、重組鼠單抗、快速鼠單抗,重組蛋白開發平臺(E.coli,CHO,HEK293,Insect Cells),已正式通過歐盟98/79/EC認證、ISO9001認證ISO13485。

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